2種類の染色法を用いて細菌Aについて調べた。
染色法1（グラム染色）では明瞭な染色像が観察されなかったため、染色法2（抗酸染色）での染色を行ったところ、染色法2では陽性であった。
染色法1、2の染色操作を図に示した。
（染色法1：スライドグラスに菌を塗抹→乾燥、固定→クリスタルバイオレット液を滴下→[染色]2分間放置→水洗→ルゴール液を滴下→[媒染]30秒間放置→水洗→エタノールを滴下（20秒間）→[脱色]水洗→サフラニン液を滴下→[対比染色]2分間放置→水洗、乾燥→顕微鏡で観察
染色法2：スライドグラスに菌を塗抹→乾燥、固定→石炭酸フクシン液を滴下→[染色]3～5分間加温→冷却後、水洗→塩酸アルコールを滴下（20秒間）→[脱色]水洗→メチレンブルー液を滴下→[対比染色]30秒間放置→水洗、乾燥→顕微鏡で観察）
細菌Aとこれらの染色法に関する記述のうち、正しいのはどれか。
2つ選べ。
正解を2つ選んでください。
正答1・5
解説
正解は1と5。
細菌Aはグラム染色で明瞭な像を示さず抗酸染色で陽性であることから、ペプチドグリカン層に加えミコール酸などの高級脂肪酸・ワックスに富む細胞壁成分をもつ抗酸菌に該当し、この脂質層が染色法1（グラム染色）でのクリスタルバイオレットの菌体内への浸透を妨げる。
染色法1で陽性の細菌は青紫色に、染色法2（抗酸染色）で陽性の細菌は石炭酸フクシンによる赤色に染まる。
ペプチドグリカン層が厚いグラム陽性菌ではクリスタルバイオレット-ヨウ素複合体はエタノールで脱色されにくく、逆に薄いグラム陰性菌で脱色される。
高級脂肪酸やワックスに富む細胞壁をもつ細菌はむしろ染色法2で染色され、抗酸菌の細胞壁のミコール酸は融点が高いため加温することで石炭酸フクシンの透過性が増す。