血清尿素窒素濃度をウレアーゼ・グルタミン酸脱水素酵素法の終点法で測定した。
血清0.02 mLに試薬1.98 mLを加えたところ、340 nmの吸光度が0.630低下した。
血清尿素窒素濃度[mg/dL]はどれか。
ただし、窒素(N)の原子量は14、NADHのモル吸光係数は6.3×10³ L·mol⁻¹·cm⁻¹とする。
正答1
解説
正解は1です。
ウレアーゼで尿素を分解するとアンモニアが2分子できます。
アンモニアはグルタミン酸脱水素酵素〈GLDH〉の反応でNADHを1分子ずつ消費するため、尿素1分子あたりNADHが2分子減ります。
尿素1分子には窒素原子が2個含まれるので、減ったNADHのモル数は尿素窒素の原子のモル数と等しくなります。
【計算】
反応液中のNADH減少濃度=ΔA÷(モル吸光係数×光路長)
=0.630÷(6.3×10³ L·mol⁻¹·cm⁻¹×1cm)=1.0×10⁻⁴ mol/L
希釈倍率=(0.02+1.98)÷0.02=100倍
血清中に換算したNADH減少量=1.0×10⁻⁴×100=1.0×10⁻² mol/L
尿素窒素(N原子)の濃度=1.0×10⁻² mol/L
質量濃度=1.0×10⁻² mol/L×14 g/mol=0.14 g/L
0.14 g/L=140 mg/L=14 mg/dL
【選択肢別解説】
1:○ 計算結果は14mg/dLで一致します。
2:× 28mg/dLは誤りです。
NADHの減少量をそのまま尿素のモル数とみなし、尿素1分子の窒素2個分(28)を掛けると、2倍に数えてしまいこの値になります。
3:× 42mg/dLは計算結果と一致しません。
4:× 56mg/dLは計算結果と一致しません。
5:× 70mg/dLは計算結果と一致しません。
【ポイント】
尿素1分子あたりNADH2分子、窒素原子2個という対応がこの計算の鍵です。
NADHの減少量がそのまま窒素原子のモル数になると理解しておきましょう。