第102回薬剤師国家試験問117

物理・化学・生物2017年☆ ブックマーク

マウスのある細胞において、タンパク質（ア）及び（イ）の産生は転写因子Xにより調節されている。両タンパク質の産生に対するその転写因子の機能を明らかにするため、以下のsiRNA（低分子干渉RNA）導入実験を行った。実験方法、原理と考察に関する記述のうち、適切なのはどれか。 2つ選べ。【実験】　転写因子Xに対するsiRNAを導入しない細胞A及び導入した細胞Bを24時間培養した。その後、細胞を破壊し、全タンパク質を回収して、それぞれ試料A及びBとした。同一タンパク質量の試料A及びBを用いてSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、分離されたゲル中のタンパク質をニトロセルロース膜に転写した。次に、そのニトロセルロース膜においてタンパク質（ア）及び（イ）に対する特異的抗体を用いた抗原抗体反応を行った。その結果、図のようにそれぞれのタンパク質に特異的なバンド（黒色）を検出した。なお、実験に用いたsiRNAは特異的に転写因子XのmRNAをノックダウンすること、そのノックダウン効果は培養24時間の時点で最大となること、さらにタンパク質（ア）及び（イ）のニトロセルロース膜への転写効率に差がないことを確認している。（図：ウエスタンブロット結果。タンパク質（ア）のレーンでは、M（マーカー、4本の灰色バンド）、試料A（上から3本目のマーカー位置に薄い黒バンド1本）、試料B（同位置に濃い太い黒バンド1本）。タンパク質（イ）のレーンでは、M（マーカー、4本の灰色バンド）、試料A（2本目マーカー付近に濃い太い黒バンド1本）、試料B（同位置に薄い黒バンド1本）。） M：あらかじめ色素にて標識した分子量の異なる既知タンパク質を電気泳動時の分子マーカーとして泳動した。